考研

　　二、实验内容

　　实验一 生化实验基本操作

　　1、基本要求

　　(1)了解实验室规则和常用生化仪器名称。

　　(2)掌握清洗玻璃仪器的正确方法。

　　(3)熟练掌握各种吸量管的选择和使用方法。

　　(4)熟练掌握溶液的配制、混匀和过滤的方法。

　　(5)学习并初步掌握各种常用生化仪器(分光光度计、离心机)的正确操作及一般维护。

　　(6)了解分光光度计、离心机等仪器设备的工作原理。

　　2、内容

　　(1)实验守则及生化实验课的要求(包括实验报告的书写)

　　(2)离心机，分光光度计的基本原理

　　(3)玻璃仪器的洗涤、刻度吸量管的选择和使用及液体混匀法

　　(4)离心机，分光光度计操作步骤及注意事项

　　实验二 血清蛋白质含量测定

　　1、基本要求

　　(1)阐明双缩脲法、紫外分光光度法测定血清蛋白质含量的原理。

　　(2)熟练掌握721型等可见分光光度计的使用方法。

　　(3)了解752紫外分光光度计的使用方法。

　　2、内容

　　(1)双缩脲法测定血清蛋白。

　　(2)酚试剂法测定血清蛋白。

　　(3)紫外分光光度法测定血清蛋白。

　　实验三 醋酸纤维素薄膜电泳分离蛋白质

　　1、基本要求

　　(1)掌握电泳技术的一般原理和醋酸纤维薄膜电泳的原理

　　(2)熟悉影响电泳速度的因素

　　(3)熟悉醋酸纤维薄膜电泳的操作

　　2、内容

　　(1)电泳概念、影响电泳速度的因素、醋酸纤维薄膜电泳基本原理

　　(2)电泳操作过程：醋酸纤维薄膜的浸泡、滤纸桥搭建、点样、电泳仪操作、染色、漂洗

　　实验四 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

　　1、基本要求

　　(1)掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的基本原理，学习操作技术。

　　(2)与醋酸纤维素薄膜电泳比较，了解聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的优点。

　　2、内容

　　(1)制胶

　　(2)装柱

　　(3)电泳

　　(4)染色和脱色

　　(5)结果判断

　　实验五 酶促反应动力学实验

　　1、基本要求

　　(1)掌握本实验中酶活性测定的各种原理与基本方法。

　　(2)认真观察实验现象，结合理论知识，阐述PH、温度、底物浓度和抑制剂对酶促反应速度的影响。

　　(3)通过本实验，初步掌握如何通过实验方法确定酶的最适PH、最适温度和测定酶的Km值。

　　2、内容

　　(1)PH对酶促反应速度的影响。

　　(2)温度对酶促反应速度的影响。

　　(3)底物浓度对酶促反应速度的影响。碱性磷酸酶米氏常数的测定。

　　(4)抑制剂对酶促反应速度的影响。竞争性抑制、非竞争性抑制。

　　实验六 激素对血糖浓度的影响

　　1、基本要求

　　(1)掌握无蛋白滤液的制备方法;

　　(2)掌握测定血糖浓度的原理、学会测定方法。

　　(3)熟悉肾上腺素、胰岛素对血糖浓度的调节作用和实验设计;

　　(4)了解测定血糖的其它几种方法及正常值。

　　(5)了解家兔的采血和注射方法

　　(6)了解人体血糖的正常范围及生理意义。

　　2、内容

　　(1)对家兔进行采血和注射激素

　　(2)葡萄糖氧化酶法测定血糖。

　　(3)观察并计算注射胰岛素—肾上腺素前后对血糖浓度的影响。

　　实验七 细胞核的分离、纯化及RNA、DNA的测定

　　1、基本要求

　　(1)初步掌握细胞核分离纯化及核酸定量测定的原理与方法。

　　(2)通过本次实验，结合以前学过的其它生化技术，初步了解亚细胞结构的分离、提纯、鉴定和细胞内成分的定量测定的一般方法。

　　(3)熟练掌握普通离心机的使用，在此基础上了解高速、超速离心技术。

　　2、内容

　　(1)小鼠肝匀浆的制备。

　　(2)细胞核的分离与纯化。

　　(3)RNA的测定。

　　(4)DNA的测定。

　　实验八 氨基酸的分离鉴定-薄层层析法

　　1、基本要求

　　(1)掌握层析法的概念

　　(2)掌握薄层层析法概念和原理

　　(3)通过氨基酸的分离学习薄层层析法的操作

　　(4)了解纸层析、凝胶层析 、层析技术及其它层析技术。

　　2、内容

　　(1)层析法概念、薄层层析法概念与原理、Rf值及影响因素

　　(2)薄层层析方法：平衡、画线与标记、点样、扩展、显色、计算Rf值。